herpes

Dijagnoza herpesa koji testovi prolaze?

Genitalna herpes infekcija (HSV, HSV) je raširena u cijelom svijetu, a epidemiološke studije pokazuju povećanje razine infekcije svugdje. Genitalni herpes je jedan od uzroka ulceroznih lezija genitalija. Infekcija herpesom je izazvana tipovima HSV 1 ili HSV-2, a većina slučajeva genitalnog herpesa povezana je s HSV-2, ali se razmatra i infekcija i HSV-1, a klinička slika prve epizode genitalnog herpesa kod bolesnika s HSV-1 i HSV-2 infekcijama je slična. a težina relapsa je manja s HSV-1 nego s HSV-2. Osim toga, težina prve epizode i reaktivacija s infekcijom HSV-2 niža je u bolesnika s prethodnim HSV-1. Treba napomenuti da je većina herpesnih infekcija asimptomatska ili nedijagnosticirana. Herpetička infekcija može izgledati atipično, što otežava postavljanje dijagnoze. Većina slučajeva prijenosa virusa na partnera ili majke na novorođenče javlja se u nedostatku kliničkih simptoma. Provedena su istraživanja koja su pokazala da HSV povećava rizik od HIV infekcije. Antivirusna terapija smanjuje kliničke manifestacije HSV, što značajno smanjuje rizik od prijenosa.

Važno je

Dijagnosticiranje herpesa važno je za određivanje taktike upravljanja, ali herpes testovi nisu uključeni u screening studije..

Postoji mnogo načina za otkrivanje HSV-a, a kliničku dijagnozu genitalnog herpesa uvijek treba podržavati laboratorijskim testovima, uključujući serotipizaciju, budući da serotip utječe i na prognozu i na režim liječenja.. Konačna dijagnoza genitalnog herpesa utvrđuje se na temelju vizualizacije specifičnih znakova u području genitalija, uz oslobađanje virusa ili otkrivanjem antigena. U nekim laboratorijima, detekcija HSV DNA pomoću molekularnih dijagnostičkih metoda zamjenjuje izolaciju virusne kulture i ELISA dijagnostiku. Serološki testovi se provode u bolesnika sa simptomima herpesne infekcije, kada izravne metode pokazuju negativne rezultate, u odsutnosti simptoma i za utvrđivanje prošle ili sadašnje infekcije.. 

Sljedeći aspekti utječu na rezultate laboratorijske dijagnostike HSV:

  • vrsta ispitivanja;
  • kvaliteta uzorka,
  • laboratorijske sposobnosti;
  • interpretacija rezultata.

Izravne metode

Uzorci dobiveni iz vezikularnih lezija unutar prvih 72 sata njihovog pojavljivanja imaju veliku dijagnostičku vrijednost. Ostali biomaterijali iz rane lezije ili studije brisanja genitalija provode se ako postoji visok rizik od HSV. Ako se na podlozi ozdravljenja pojave kore, vjerojatnost otkrivanja HSV-a značajno se smanjuje. Upotreba agresivnih sredstava za dezinfekciju lezija može inaktivirati virus. Tretiranje kalcijevim alginatom je štetno za HSV i stoga nije primjenjivo..

Važno je

Izravni testovi potvrđuju prisutnost HSV-a u sumnjivom fokusu ili u izlučevinama genitalija. U idealnom slučaju, analiziran je uzorak iz mjehura koji se pojavio prije manje od 24 sata..

Ako ima mnogo mjehurića, usisajte sadržaj nekoliko. Prema istraživanjima, osjetljivost analize niža je u bolesnika s recidivnim lezijama nego u bolesnika s prvim epizodama.

U nekim slučajevima, elektronska mikroskopija tekućeg biomaterijala može dati pozitivan rezultat. Taj je postupak, iako brz, relativno neosjetljiv, a pozitivni rezultati pojavljuju se samo s vanjskim lezijama (osip na stražnjici ili bedrima, rjeđe na sluznicama). Poželjno je uzeti tekućinu za analizu iz cijele mjehuriće pomoću tuberkulinske štrcaljke, dok je aspiracija sadržaja dovoljna..

Kapljica se suši na zraku i ispituje se mikroskopom..

Neki laboratoriji koriste molekularne metode za detekciju i tipizaciju HSV. Uzorci uzeti za izolaciju ili detekciju antigena su također prikladni za metode detekcije DNA. Povećana osjetljivost PCR dijagnostike na temelju amplifikacije nukleinskih kiselina, u usporedbi s drugim izravnim metodama (detekcija kulture ili antigena), omogućuje analizu materijala s minimalnim brojem patogenih čestica.

Standardna virusna kultura

Sjetva na hranjivom mediju je zlatni standard za otkrivanje HSV, specifičnost je 100% za HSV-1 i HSV-2, osjetljivost ovisi o stadiju herpesne infekcije i vremenu primitka uzorka..

Osjetljivost se kreće od 75% za prve epizode do 50% za relapse..

RIF u herpesu

Detekcija HSV antigena bojanjem s DFA razmazom (fluorescencija) može osigurati brzo određivanje kulture stanica. Važno je da se za ovu analizu dobije visokokvalitetan uzorak; u ovom načinu, osjetljivost testa može doseći 90%, osobito tijekom početne infekcije.

Materijal se boji posebnom fluorescentnom tvari, nakon čega slijedi mikroskopija.

Detekcija virusnog antigena alternativa je dijagnostičkoj metodi kulture, metoda koja može pomoći kada, ako nepravilno obrađuje i prevozi uzorke, bilo koji prisutni virus može biti inaktiviran. 

Za potvrdu HSV, osjetljivost testa je slična ili viša od one u metodama kulture..

Detekcija HSV antigena moguća je pomoću DFA testova ili imunoperoksidaznih testova na fiksnim i tretiranim uzorcima stanica.. 

Dzank mrlja

Herpetička infekcija uzrokuje tipične citopatske promjene u genitalnim epitelnim stanicama. Povećavaju se veličina, pojavljuju se intranuklearne inkluzije, a često se vizualiziraju i multinuklearne stanice. Nakon posebnog bojenja, uzorci se pregledavaju pomoću svjetlosnog mikroskopa..

Nedostaci: ova metoda ima nisku osjetljivost i ne razlikuje HSV-1 i HSV-2. Osim toga, slična slika može biti, na primjer, kod vodenih kozica.

Za potvrdu dijagnoze potrebni su osjetljiviji testovi..

Elektronska mikroskopija

Izravna studija vezikularne tekućine ili drugog kliničkog materijala pomoću elektronske mikroskopije za dijagnozu HSV ograničena je činjenicom da morfologija virusa također ne dopušta razlikovanje HSV od drugih herpes virusa (na primjer, varičela-zoster virus). Ova tradicionalna metoda je u velikoj mjeri zamijenjena bojanjem fluorescentnim razmazom, što je dalo specifičnu vrstu diferencijacije za HSV-1 i HSV-2.

Detekcija DNA virusa

Virusna DNA može se detektirati metodama hibridizacije upotrebom radioaktivno označenih ili biotiniliranih uzoraka. Ove metode su u velikoj mjeri zamijenjene osjetljivijim i manje dugotrajnim studijama koje koriste amplifikaciju ciljne HSV DNA pomoću lančane reakcije polimeraze (PCR). Specifičnost metode amplifikacije osigurana je ili provođenjem ponovljene PCR dijagnostike s ciljnim specifičnim prajmerima, ili korištenjem HSV-specifične hibridizacije s amplificiranim produktima..

U slučaju mogućeg genitalnog herpesa, PCR detektira virusnu DNA unutar nekoliko dana nakon što lezija ne sadrži dokazni infektivni virus. To znači da dijagnostička metoda koja se temelji na amplifikaciji nukleinske kiseline može proizvesti pozitivan rezultat čak i kada se pojavi simptomatski oporavak i liječenje više nije potrebno..

Negativni rezultati zasijavanja obično se potvrđuju PCR dijagnostikom. Osjetljivost PCR-a veća je od standardne kulture. Pojava PCR u stvarnom vremenu smanjila je rizik od lažno pozitivnih rezultata.. 

Neizravne serološke analize

Oko 8-10 ml krvi sakupljeno je u epruveti bez antikoagulansa ili konzervansa. Nakon koagulacije na sobnoj temperaturi, serum se centrifugira i stavi u drugu epruvetu. Ako je skladištenje potrebno nekoliko tjedana, serum se hladi na 4 ° C ili zamrzava na temperaturi ispod -20 ° C. Ne preporučuje se zamrzavanje cijele krvi zbog hemolize, što uzorak čini neprikladnim za serološka ispitivanja..

Analiza za otkrivanje antitijela na HSV propisana je kada se druge virološke studije ne mogu provesti ili dati negativne rezultate. To posebno vrijedi za asimptomatsku infekciju..  

Serološki testovi na HSV mogu se primijeniti u sljedećim slučajevima:

  • proučavanje prijenosa herpesne infekcije na partnera;
  • prva epizoda infekcije, osobito u trudnica;
  • rekurentni HSV;
  • anketa neusklađenih parova,
  • planiranje trudnoće (muškarac je pozitivan, žena je negativna);
  • Opterećena opstetrijska i ginekološka anamneza sa sumnjom na herpesnu infekciju;
  • skrining za SPI;
  • probir kod pacijenata inficiranih HIV-om radi otkrivanja HSV-2.

Iako mnogi serološki testovi otkrivaju antitijela na HSV, nije moguće uspostaviti određeni tip (1 ili 2).

Postoji bliska serološka veza između HSV-1 i HSV-2, od kojih svaka kodira serološki različit glikoprotein G (gG-1 i gG-2). Ta se razlika koristi u razvoju seroloških testova specifičnih za određeni tip.. 

ELISA, imunobloting

Imunobloting (WB) je standard za detekciju antitijela na HSV. Testovi imaju visoku osjetljivost i sposobnost razlikovanja antitijela od HSV-1 i HSV-2. Reakcija se odvija s oslobađanjem fiksiranih proteinskih matrica ("blots") iz lizata HSV-1 ili HSV-2 stanica.

Najveća dijagnostička vrijednost je definicija IgM antitijela, koja se pojavljuju približno 2 tjedna nakon infekcije, ili su prisutna u krvi tijekom kronične infekcije ili njezine aktivacije..

IgG se određuje dugotrajnim postojanjem infekcije u tijelu ili kada se aktivira.

Važno je

ELISA metoda može biti kvantitativna (određivanje titra antitijela, viši, oštriji proces) i kvalitativna (prisutnost virusa, tip, antitijela, prethodni recidivi).

Otkrivanje protutijela na predanimnim proteinima virusa pomaže u procjeni trajanja procesa.

Dešifriranje analize ELISA za herpes:

  • IgM "-", IgG do "+" proteina, IgG kasno "+" / primarna akutna infekcija ili recidiv.
  • IgM "-", IgG prema preuranjenim proteinima "-", IgG kasni "+" / imaju imunološki odgovor na virus herpesa (nosač).
  • IgM "+", IgG do "+" pred-proteinskih proteina, kasni IgG "-" / primarna akutna infekcija.
  • IgM "+", IgG do "+" proteina, IgG kasni "+" / primarna akutna infekcija.
  • IgM "-", IgG na prijevremene proteine ​​"-", IgG kasno "-" / norma, što ukazuje na odsustvo patološkog procesa.

Ispitivanje otpornosti

Postoji niz antivirusnih lijekova za liječenje HSV infekcija; većina njih je propisana aciklovir. Otpornost HSV na aciklovir raste, a gotovo svi klinički značajni sojevi otporni na aciklovir dijagnosticiraju se kod imunokompromitiranih pacijenata, posebno onih koji su zaraženi HIV-om. Razvoj otpornosti obično nastaje kao rezultat mutacija u virusnom genomu, a prisutnost selektivnog učinka lijeka dovodi do stabilne populacije virusa. Izolacija HSV od perzistirajućih lezija, usprkos odgovarajućim dozama, sumnjiva je na otpornost na aciklovir.

Koje se bolesti koriste za diferencijalnu dijagnozu herpesa?

Diferencijalna dijagnoza se provodi sa sljedećim patologijama:

  • Bechtechov sindrom (neinfektivni vaskulitis, karakteriziran orogenitalnim aftoznim čirevima, oštećenjem kože i očiju i zahvaćanjem CNS-a, gastrointestinalnog trakta i zglobova);
  • kandidijaza;
  • mekani šankr;
  • Coxsackie virus;
  • herpes zoster;
  • sifilis;
  • Crohnova bolest;
  • neke dermatoze;
  • ingvinalni granulom, itd..

Mishina Victoria, urolog, liječnik